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产品详情
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
英文名称：BEZ235
产品规格：10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
货号：FS-X10322
产品介绍:
英文名称：BEZ235 产品规格：10mg|50mg|100mg|200mg|500mg BEZ235是一种双重的泛class IPI3K和mTOR抑制剂，作用于p110α/γ/δ/β和mTOR，IC50分别为4nM/5nM/7nM/75nM和20.7nM。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ 号：915019-65-7 别名：NVP-BEZ235 纯度：98.83% 分子量：469.54 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
红球菌转化因子样蛋白4抗体Human ONECUT1 生存(survivin)
高山被孢霉NADH复合体5抗体Human OPA3 肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)
动物双歧杆菌乳亚种肌微管1抗体Human OPTN 肾损伤分子1(Kim-1)
栎小皮伞髓性白血病蛋白1抗体Human OFD1 肾(Renin)
Au（黑木耳）磷化丝裂原活化蛋白激1抗体Human OGT 肾上腺髓质前体(Pro-ADM)
克鲁斯假丝酵母组织相容性复合体2抗体Human OIP5 肾上腺髓质(ADM)
变位艾美耳球虫磷化雷帕霉靶蛋白抗体Human OLFM1(Olfactomedin-1) 肾上腺能a1A受体(ADRA1A)
胶冻样类芽孢杆菌甲基化CpG结合蛋白2抗体Human OLFM2 肾上腺(EPI)
梨生囊壳孢磷化雷帕霉靶蛋白抗体Human OLFM3 肾上腺皮质抗体(ACA)
拟可可毛球二孢NADH复合体6抗体Human OLIG2(Oligodendrocyte transcription factor 2) 蛋白(nephrin)
黑曲霉黑色瘤相关抗原11抗体Human OMA1 肾(RNLS/MAO-C)
灰绿犁头霉同源盒基因Msx2抗体Human ODF2L 神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)
香菇磷化丝/苏蛋白激MARK4抗体Human OMCG1 神经营养因子4(NT-4)
围小丛壳膜型基质金属蛋白胞质尾结合蛋白1抗体Human OCTN2 神经营养因子3(NT-3)
苹果盘二孢周期调节蛋白P95抗体Human OCRL 神经型一氧化氮合成(nNOS)
酿酒酵母自噬微管相关蛋白轻链β3抗体Human DNAJB1(DnaJ homolog subfamily B member 1) 神经粘着分子(NRCAM)
ATCC7830资源名称: 德氏乳杆菌乳亚种 质量规格：>98.0%(HPLC)蜕皮激
塔宾曲霉Aspergillus│tubingensis 质量规格：>98.0%(T)根皮
AS2.338资源名称: 异常汉逊酵母 质量规格：>98.0%(HPLC)(T)梓
IPI3K和mTOR抑制剂(BEZ235)大肠埃希氏O抗原微量凝集定型血清诊断液 甲戊酯p53诱导基因3
大肠杆 N-α-羰基苯氧基-D-精Periostin
人参土成对杆 辛戊酯P糖蛋白;渗透性糖蛋白
白色金针菇 3-甲基-2-乙酯P物质
孟氏假单胞 4-乙酰乙乙酯P选择
大肠埃希 己己酯Ras同源基因家族成员A
鸡伤门氏 叠氮乙乙酯Rho关联含卷曲螺旋蛋白激1
微小杆 四氢糠乙酯Rho关联含卷曲螺旋蛋白激2
串珠镰孢 2-氟-5-甲R-脊椎蛋白1
交替红色杆属 2(3H)-4-氟苯并噻唑酮S100B蛋白
矮被孢霉 邻乙酰氨基对S100蛋白
金耳 6-氟-2(3氢)苯噻唑酮S100钙结合蛋白A8;A9复合物
酿酒酵母 邻乙酰氨基对SKA2
豇豆慢生根瘤 苯炔Syndecan-1;CD138
藤仓镰孢 6,8-二溴-咪唑[1,2-A]吡Tamm-Horsfall蛋白
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
