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CDK抑制剂(LEE011 hydrochloride)

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更新时间:2023-08-14

有效日期:还剩58

产品详情

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称:CDK抑制剂(LEE011 hydrochloride)

英文名称:LEE011 hydrochloride

产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

货号:FS-X11088

产品介绍:

LEE011盐酸盐是CDK抑制剂,能靶向cyclin D1/CDK4和cyclin D3/CDK6,具有抗癌活性。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

号:1211443-80-9

别名:Ribociclib hydrochloride

分子量:471.0

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

尿皮质suUCN3抗体 Urocortin 3

上调基因4抗体(C端) URG4 (C terminal)

尿调节蛋白抗体 Uromucoid

su融合降解样蛋白1抗体 UFD1L

su特异性蛋白mei9X抗体 USP9X

去泛sumei抗体 USP

G蛋白偶联受体14抗体 GPR14

尿皮质su抗体 Urocortin

su羧基末端水解mei5互相作用蛋白1抗体 UCHL5IP

葡萄膜自身抗原Uaca抗体 UACA

FUT3抗体 FUT3/CD174

尿二磷suan葡萄糖醛suan转移mei2B4抗体 UGT2B4
CDK抑制剂(LEE011 hydrochloride)富士山红酵母 毛萼晶乙

ATCC 35659 Magnoloside A

链轮枝 Magnolianin

嗜麦芽糖寡养单胞 大果桉 L

许旺酵母 大果桉 K

耐盐深海球 大果桉 J

黑曲霉 垂石松 A

松口蘑 大果桉 I

胶纹灵芝 Longifloroside A

佛罗里达侧耳 柠檬

副鸡嗜血杆 Leuconolam

解淀粉芽孢杆 Labd-13-ene-8,15-diol

克鲁斯假丝酵母 南五味子

泡盛曲霉 2,2,4-基-1,3-戊二

贝伦格葡萄座腔 Itol A
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)




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