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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96542 |
商品属性:
名称 SW480 (SW-480) (结肠癌细胞) 别称SW-480; SW 480; SW480E 种属人类 年龄(性别)男性,50岁 组织来源直肠;结直肠腺癌 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述SW480 [SW-480]细胞源自原位直肠腺癌,和SW620细胞源自同一病人一年后的淋巴结转移。CSAp和直肠抗体3阴性;角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代,309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代。细胞p53蛋白表达水平提高,癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性,癌基因N-myc的表达未做检测。SW480 [SW-480]细胞不表达细胞溶解酶,一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称,SW480 [SW-480]细胞表达GM-CSF。SW480 [SW-480]细胞ras原癌基因的12位密码子有一个突变,可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。1978年11月,A·Leibovitz将其提交给ATCC时已传代至第91代。 生物安全等级1 生长培养基Leibovitz's L-15+10% FBS+1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~30-50小时 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,100% 温度:37℃ 致瘤性Yes. Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells. 受体表达情况epidermal growth factor (EGF) 基因表达情况carcinoembryonic antigen (CEA) 0.7 ng/10^6 cells/10 days; keratin; transforming growth factor beta, myc+; myb+ ; ras+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, HLA A2, B8, B17; Blood Type A; Rh+, The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining., The line is positive for expression of c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis and fos oncogenes. 注意事项1、该细胞推荐使用Leibovitz's L-15培养基进行培养,Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳,会产生细胞毒性; 2、该细胞不建议更换为DMEM培养,圆形较多,效果不好。 |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠 NT5E 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 NT5E 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 MED1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 FRS2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 ALDH1L1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 RABGEF1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 PLD3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 DUSP10 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 GTF2A1L 基因全长
SW480 (SW-480) (结肠癌细胞) MH肉汤(MHB) Mueller-Hinton Broth 250g 0.312-20 ng/mL 人Dickkopf 相关蛋白2(Dickkopf-2)ELISA试剂盒
2 ug pOTB7 NOXA1 pOTB7 NOXA1 低温运输,-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Regulatory-associated protein of mTOR
50T 肺耐药蛋白基因PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
2000 U 限制性内切HindIII Restriction Endonuclease -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人外核苷酸焦/二酯2(ENPP2)ELISA试剂盒
2 ug pETBlue-1 pETBlue-1 低温运输,-20℃保存胰蛋白胨水培养基进口、国产Peptone Water Medium250克用于靛基质试验
2 ug pLOX-TERT-iresTK pLOX-TERT-iresTK 低温运输,-20℃保存 15.6-1000 pg/mL 鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
10mL 超级杂交液(芯片) SuperHyb Solution for Chip -20℃保存
改良EC肉汤(mEC+n) Modified EC Broth 250g麦康克琼脂3号进口、国产Maconkey Agar 3250克用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)
100mg 昆布多糖 Laminarin 室温干燥保存
50T 丙型脊髓灰质炎病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 0.312-20 ug/mL 人巨噬唾液酸蛋白(Macrosialin)ELISA试剂盒
100mL MES Buffer,0.5M,pH5.5 MES Buffer,0.5M,pH5.5 常温保存 0.156-10 ng/mL 人E3泛素蛋白连接HACE1(E3 ubiquitin-protein ligase HACE1)ELISA试剂盒
智能压力变送 方向控制回路 小型高低温测试机 自动影像测量仪 中国大型低温制冷设备 反向离子对色谱柱 SL-001离子风机 DHJ-91颗粒计数器 电动油压泵 电容开关 24口全千兆WEB网管交换机BL-G5224-FM 防火调节阀 DMG1671F兆欧表 快速离心浓缩冻干仪 单功能校验仪 电磁相位流量计 石化反应器 多路温度采集 小型药材切片机 自动离合器控制系统 电磁辐射测量仪 耐高温继电器 卧式螺旋卸料过滤式离心机 ET308 红外热成像仪 乙炔减压器 管式气氛电阻炉 阀件超声波清洗机 丹佛斯温度传感器 气象仪器 管路截止阀 iLDM-150云服务激光测距仪 报警器及传感器 HJ浸没式汽水混合器 化工用切片机 WS-01恒温恒湿培养箱 TOC快速测定仪 卫生型玻璃转子流量计 NY-Ⅳ农药残留检测仪 一体化孔板流量计 CYJ-1型双波纹管差压液位计 WZ系列铠装热电阻 手持式自动气象仪 杜马斯燃烧法快速定氮仪 光学尺 SF6气体泄漏测量仪 控温电热套 热蒸发型加湿器 不锈钢升降式止回阀 交流恒流源 声波生命探测仪