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产品介绍:
工作原理: 在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH末端,DIG-dUTP结合在DNA断点部位,可以通过生物标记的抗抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后,再结合链酶亲和素-过氧化物酶(SABC),然后加入显色底物DAB予以显示。凋亡的细包核呈黄色,从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。 试剂盒内容: 1.标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封闭液(Blocking Reagent)4ml 5.生物su化抗抗体(× 100)20μl 6.SABC(× 100)20μl 7.Proteinase K(×200)50μl 8.抗体稀释液 4ml 保存条件:-20℃冰冻保存。 保存期:一年 |
中文名称:细胞凋亡检测试剂盒I(POD)
英文名称:
产品规格:20T
货号:FS-X9643
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
血管内皮细胞蛋白C受体(PROCR)检测试剂盒 forProteinCReceptor,Endothelial(PROCR)
异柠檬suan脱氢mei1(IDH1)检测试剂盒 forIsocitrateDehydrogenase1,Soluble(IDH1)
Arkadia蛋白(ARK)检测试剂盒 forArkadia(ARK)
白介su6受体(IL6R)检测试剂盒 forInterleukin6Receptor(IL6R)
凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒 forFactorRelatedApoptosis(FAS)
jia胎蛋白(αFP)检测试剂盒 forAlpha-Fetoprotein(aFP)
旁血小板溶蛋白(PPL)检测试剂盒 forPeriplakin(PPL)
转运蛋白2(TNPO2)检测试剂盒 forTransportin2(TNPO2)
20S-蛋白mei体(20S-PSM)检测试剂盒 for20S-Proteasome(20S-PSM)
白细胞免疫球蛋白样受体亚家族A成员3(LILRA3)检测试剂盒 forLeukocyteImmunoglobulinLikeReceptorSubfamilyA,Member3(LILRA3)
5-羟色an受体6(HTR6)检测试剂盒 for5-HydroxytryptamineReceptor6(HTR6)
蛋白二硫化物异构meiA4(PDIA4)检测试剂盒 forProteinDisulfideIsomeraseA4(PDIA4)
粘蛋白5AC(MUC5AC)检测试剂盒 forMucin5SubtypeAC(MUC5AC)
载脂蛋白A4(APOA4)检测试剂盒 forApolipoproteinA4(APOA4)
suan激mei(PK)检测试剂盒 forPyruvateKinase,LiverAndRBC(PK)
基质金属蛋白mei27(MMP27)检测试剂盒 forMatrixMetalloproteinase27(MMP27)
细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)检测试剂盒 forSuppressorsOfCytokineSignaling3(SOCS3)
细胞凋亡检测试剂盒I(POD)氨jia环suan相关物质C标准品 规格:15mg 英文名称:
紫杉chun标准品 规格:200mg 英文名称:Paclitaxel
富马suan噻吡二an标准品 规格:200mg 英文名称:Methapyrilene Fumarate
妥布霉su标准品 规格:350mg 英文名称:Tobramycin
睡茄交酯 A标准品 规格:15mg 英文名称:Withanolide A
利相关物质A标准品 规格:15mg 英文名称:
绿原suan标准品 规格:50mg 英文名称:Chlorogenic Acid
盐suan拉贝尔标准品 规格:200mg 英文名称:Labetalol Hydrochloride
异fu烷相关物质A标准品 规格:0.1ml 英文名称:
ben磺suan美索达嗪标准品 规格:250mg 英文名称:Mesoridazine Besylate