产品详情
小鼠α半乳糖基抗体(Gal)Elisa试剂盒 ,上海采佑实业有限公司经营各类Elisa试剂盒 ,种属齐全,品种繁多,目前比较流行的试剂盒品牌为德国IBL,美国TSZ等,我们公司做为总代理,进口原装/分装均为现货供应,目前公司正在做*活动。咨询。
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客服:(高杰),,或
我公司提供各种种属试剂盒如:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊等。
欢迎新老客户前来咨询。
标本齐全:血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
经营品牌:RD、RB、IBL等
保存条件:2~8℃
有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。
小鼠α半乳糖基抗体(Gal)Elisa试剂盒 ,标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书*方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用试剂C 稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),37
℃湿盒中孵育30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用DAB 溶液(试剂F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
注意事项:
1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
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