小鼠可溶性白细胞分化抗原30配体（sCD30L）Elisa试剂盒

小鼠可溶性白细胞分化抗原30配体（sCD30L）Elisa试剂盒 ，上海采佑实业有限公司经营各类Elisa试剂盒  ，种属齐全，品种繁多，目前比较流行的试剂盒品牌为德国IBL，美国TSZ等，我们公司做为总代理，进口原装/分装均为现货供应，目前公司正在做*活动。咨询。

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标本齐全：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…

经营品牌:ＲＤ、ＲＢ、ＩＢＬ等

保存条件：2~8℃

有效期：６个月

运输条件：低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

小鼠可溶性白细胞分化抗原30配体（sCD30L）Elisa试剂盒  ，标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

实验步骤（建议方案）：

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；

2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

10 min；

3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%

乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修复： 根据抗体说明书*方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温

度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×

2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，

直接进入第5 步封闭。

5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育

30 min；

10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；

11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用试剂C 稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37

℃湿盒中孵育30 min；

13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；

14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；

15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；

17.观察成像： 显微镜下观察成像。

注意事项：

1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致

结晶或抗原封闭。

2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使

用。

3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。

4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会

影响结果观察。

5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封

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