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产品详情
产品属性：
| 产品名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
| MTT检测试剂盒 | MTT Assay Kit | 500次 | FS-01X98522 |
MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
产品介绍：
| 产品特点： 1．采用*的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。 2．背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。 3．本产品为足够500次(5个96孔细胞培养板)微孔板检测。 4．可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等。 储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。 使用方法： 下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。 ㈠、接种细胞 1．按常规消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。 2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。 3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。 4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。 5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。 6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。 7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。 8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。 ㈡、药物处理 9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。 10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。 11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。 12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。 13．按常规方法把96孔板继续放在在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。 14．处理结束后去除第2 到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。 15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。 ㈢、存活细胞计数 16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。 17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。 18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。 19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。 20．计数同样处理的各次重复的平均值。 21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为100%)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。 |
注意事项：
1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。
7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性，则测定不含细胞，仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入 MTS ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。
9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，对于大多数情况孵育 1 小时即可，白细胞需要培养较长时间。
11、如果不是使用 96 孔板检测，MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。
生长分化因子11(GDF11)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Homo sapiens (Human)
C4结合蛋白β(C4BPβ)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for C4 Binding Protein Beta (C4BPb) 96T Homo sapiens (Human)
补体因子P(CFP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Factor P (CFP) 96T Homo sapiens (Human)
生长分化因子11(GDF11)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Mus musculus (Mouse)
核因子κB受体激活因子配基(RANκL)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL) 96T Rattus norvegicus (Rat)
补体成分1r(C1r)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, R Subcomponent (C1r) 96T Homo sapiens (Human)
生长调节致癌基因β(GROβ)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Regulated Oncogene Beta (GROb) 96T Homo sapiens (Human)
补体成分1s(C1s)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, S Subcomponent (C1s) 96T Homo sapiens (Human)
补体成分8γ(C8γ)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 8g (C8g) 96T Homo sapiens (Human)
水解酶(BLMH)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Bleomycin Hydrolase (BLMH) 96T Homo sapiens (Human)
前梯度蛋白2(AGR2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Anterior Gradient Protein 2 (AGR2) 96T Homo sapiens (Human)
络丝蛋白(RL)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Reelin (RL) 96T Rattus norvegicus (Rat)
甲状腺激素反应基因(THRSP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Thyroid Hormone Responsive (THRSP) 96T Homo sapiens (Human)
蛋白C抑制因子(PCI)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Protein C Inhibitor (PCI) 96T Homo sapiens (Human)
妊娠相关血浆蛋白A2(PAPPA2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Pappalysin 2 (PAPPA2) 96T Homo sapiens (Human)
补体成分1q子成分C(C1qC)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement Component 1, Q Subcomponent C (C1qC) 96T Homo sapiens (Human)
泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L1 (UCHL1) 96T Rattus norvegicus (Rat)
生长分化因子11(GDF11)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11) 96T Rattus norvegicus (Rat)
生长分化因子5(GDF5)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 5 (GDF5) 96T Homo sapiens (Human)
4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷 （MUG） 0.1 M58129 0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鉴定
mEC 肉汤 mE.Coli Broth 250 M58130 用于0157选择性增菌(USDA-FSIS方法)
mTSB肉汤 mTSB Broth With Novobiocin 250 M58131 用于0157选择性增菌(ISO方法)
新生霉素A Novobiocin 2mg/支*5 M58132 添加于100ml mEC肉汤和mTSB肉汤中用于0157选择性增菌
SD-39琼脂 SD-39 Agar 250 M58133 用于滤膜法大肠杆菌0157的分离培养(NEOGEN方法)
平板计数琼脂（PCA） Plate Count Agar 250 M58134 国际标准平板计数琼脂,含糖,用于细菌总数的测定(SN标准)
煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB） Brilliant Green Lactose Bile Broth 250 M58135 用于大肠菌群、大肠杆菌的测定(SN标准)
EC 肉汤 E.Coli Broth 250 M58136 用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(SN标准)
伊红美蓝琼脂 (EMB) Eosin-Methylene Blue Agar 250 M58137 弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌(SN标准)
营养肉汤 (NB) Nutrient Broth 250 M58138 一般细菌培养、转种、复壮、增菌等(GB标准)
营养琼脂 (NA) Nutrient Agar 250 M58139 细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)
乳糖胆盐发酵培养基 Lactose Bile Broth 250 M58140 用于大肠菌群，粪大肠菌群，大肠杆菌的测定(GB标准)
乳糖复发酵培养基 Lactose Broth 250 M58141 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)
去氧胆酸盐琼脂 Desoxycholate Lactose Agar 250 M58142 用于大肠杆菌固体平板测定,肠道菌选择性分离
MR-VP培养基 Methyl Red Voges Proskauer Broth 250 M58143 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准)
结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 250 M58144 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
西蒙氏枸橼酸盐琼脂 Simmons Citrate Agar 250 M58145 用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)
肠道菌计数琼脂 (VRBDA) Violet Red Bile Dextrose Agar 250 M58146 用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别(MERCK方法)
菌种保存培养基 Strain Store Medium 250 M58147 用于常用细菌斜面传代及室温保存
乳糖蛋白胨培养液 Lactose Peptone Broth 250 M58148 用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)
Cary-Blair 氏运送培养基 Cary-Blair Transport Medium 250 M58149 用于运送肠道致病菌标本
MTT检测试剂盒哥伦比亚血琼脂基础 Columbia Blood Agar Base 250 M58150 营养非常丰富，用各种细菌的基础培养基(AFNOR EP IDF标准)
亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 250 M58151 用于饮用天然矿泉水中大肠杆菌的检验(GB标准)
操作步骤：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
