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产品详情
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：拓扑异构酶抑制剂(Daun02)
英文名称：Daun02
产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg
货号：FS-X10627
产品介绍:
Daun02经过β半乳糖苷酶β-galactosidase催化反应生成Daunorubicin，Daunorubicin是拓扑异构酶(topoisomerase)抑制剂。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ 号：290304-24-4 纯度：98.56% 分子量：884.79 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
半软干酪居真菌细菌PE-CY5标记的羊抗鸡IgGAnti-SP1 Antibody古梅斯蛋白1(AMZ1)
大肠埃希氏杆菌APC标记的羊抗鸡IgGAnti-SP4 Antibody孤啡肽(OFQ)
灰黄青霉Alexa Fluor 350标记的羊抗鸡IgGAnti-SP4 Antibody孤菲肽原(PNOC)
枯草芽孢杆菌罗丹明标记的羊抗鸡IgGAnti-SP6 Antibody孤菲肽受体(NOCIR)
鸡油菌胶体金标记的羊抗鸡IgGAnti-SP5 Antibody孤儿磷2(PHOSPHO2)
冠突曲霉FITC标记的羊抗鸡IgGAnti-SPARC Antibody孤儿磷1(PHOSPHO1)
环状芽孢杆菌碱性磷（AP）标记的羊抗鸡IgGAnti-SPARCL1 Antibody根蛋白(RDX)
葡萄座腔菌辣根过氧化物标记的羊抗鸡IgGAnti-SPARC Antibody阴离子转运蛋白1(TAT1)
多粘类芽孢杆菌碱性磷（AP）标记的羊抗人IgGAnti-SPARC Antibody受体4(TR4)
苏云金芽孢杆菌罗丹明标记的羊抗人IgGAnti-SPARC Antibody受体2(TR2)
枯草芽孢杆菌Cy7标记的羊抗人IgGAnti-SPARCL1 Antibody睾(Testosterone)
果生链核盘菌PE标记的羊抗人IgGAnti-SPHK1 Antibody睾3(TIC3)
枯草芽孢杆菌生物标记的羊抗人IgGAnti-SPCS1 Antibody睾2(TIC2)
放线纤维菌Alexa Fluor 555标记的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody睾1(TIC1)
球形芽孢杆菌Alexa Fluor 647标记的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody高铁血红蛋白还原(MHBR)
孔雀石褐链霉菌PE-Cy5.5标记的羊抗人IgGAnti-SPP1 Antibody高迁移率族核小体结合域蛋白1(HMGN1)
核有丝分裂器NuMA蛋白抗体胶冻样类芽孢杆菌大鼠神经星形胶质细胞提取物
抑癌基因NDRG2抗体乳酒假丝酵母大鼠嗅鞘细胞提取物
DNA损伤关卡蛋白1抗体扩展青霉大鼠神经元细胞提取物
神经细胞发育相关调控蛋白抗体杂色曲霉原变种大鼠小脑颗粒细胞提取物
拓扑异构酶抑制剂(Daun02)球孢白僵 Fmoc-3-(2-萘基)-L-β-防御
平滑针层孔 芥β-羟基丁
鲍氏志贺氏（现1） L-古洛糖-γ-内酯γ干扰
西提亚橄榄形 1-乙基萘白介1β
托姆青霉 8-羟基喹啉-N-氧化物白介1受体拮抗剂
链格孢 三乙二乙白介2
Rhodobacter johrii 10-十一烯白介4
牛链球 十一白介6
根瘤 10-十一烯表皮生长因子
水栖黄杆 4-硝基吡啶-N-氧化物层粘连蛋白
白乳菇 十一超氧化物歧化
梅林青霉 十一触珠蛋白相关蛋白
微小杆 1-丁基-4-甲基化吡啶鎓雌二
克鲁斯假丝酵母 2-溴-5-氟苄溴促黄体
英诺克李斯特氏 5－氨基苯并噻唑促卵泡
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
