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酶标仪在用单波长测定吸光度时,除受到测定内源性干扰(包括噪音、漂移、电压等)因素外,受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中,由于液面表面张力的作用,液体的表面不是一个平面,而是形成一个凹面,从侧面看似凹透镜,这样不可避免会siyuekvpw影响光路的正常通过。由于凹液面的影响,光线在通过液面时,除正常的被液体吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光线通过凹透镜那样),影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源,如果每次能在同一部位检测,吸光度的重复性将得到保证,但由于机械运动等造成的误差,不可能保证每孔都在相同部分被检测,因此造成了孔与孔之间有一定的差异。
在双波长测定中,减少了测定干扰和电路干扰,因此测定结果明显好转。由于液体表面张力的不同, 导致单波长测定时误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到后加入底物和终止液后的液面情况,用加入表面活性剂的洗涤剂清洗后,形成的液面更凹,对单波长检测的影响更大,并且与表面活性剂的浓度成正比。而用中性蒸馏水洗涤后,单、双波长检测技术结果基本一致。
在酶联免疫法测定抗原、抗体中,常用标记酶辣根过氧化物酶所使用的底物一般是邻苯二ht tp: //w ww.pl999.c om胺或四甲基联苯胺,显色终止后,二者在630nm 和655nm处的吸光度值都只在吸收峰处(492nm/450nm )吸光度值的1%以下,因此,利用双波长检测,不会影响检测的灵敏度。建议在进行酶联免疫检测时,酶标仪比色应该首先双波长。这样可以提高临界值处标本的分析准度,减少实验误差。
(普朗医疗——酶标分析仪9602A)
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