23966-Polysciences全国代理-上海鼎桑

我们公司zui大优势是强大的采购：

 上海鼎桑生物科技有限公司一家专注于生命科学的科技企业，由在国内科研试剂领域有着丰富从业经验的技术团队和管理团队组建而成，专营进口生物试剂，科学仪器，实验消耗品等。
      公司将不断把上优质的产品引入国内市场，满足客户的需求，公司也将紧跟生命科学的发展，为广大科研工作者探索生命科学的奥秘奉献绵薄之力.

Polysciences全国代理-上海鼎桑

Polysciences全国代理-上海鼎桑

PEI转染手册

转染操作流程：

 1、细胞传代：

转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基 中进行传代培养，接种密度如下：
        6孔板：0.5x10⁶细胞
        10cm培养皿：4.0x106细胞
        15cm培养皿：9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中，用无血清的DMEM W / O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
     

6孔板：200ul+3ug的DNA
       10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA
       15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA

  2.2 转染复合体形成

将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
     

6孔板：9ul PEI复合体（1ug/ul）=9ug
       10cm培养皿：21ul PEI复合体（1ug/ul）=21ug
       15cm培养皿：33ul PEI复合体（1ug/ul）=33ug
将添加到细胞的DNA/ PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。

试剂的配制：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配制成储液：)
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。
2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃

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