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Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书

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  • 上海上海市

更新时间:2023-04-06

有效日期:还剩7

产品详情

操作方法:
一 、Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书热激转化法
1.    从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2.    42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3.    向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4.    根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平       板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法                             
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH 5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。

使用说明:
1. Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3. 42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。


培养方法:
Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况,如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
培养实验又要开始了,科研工作者又该忙碌了,大家可能都在寻找适合自己的细胞,不用急,我们帮您掌舵,让您满意!
传代方法:细胞*汇合时,倒掉旧液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,显微镜下观察细胞*脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶,加培养基混匀分瓶,T25瓶中加培养基至6-8ml,T75瓶加培养基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培养。
中文名称:Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书
规格:100ul*10
用途:生化试剂。(用于科研试验研究)  
储存条件: -70℃保存,必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月。
外观:(性状) 干冰运输,单加10kg干冰费
单位: 袋

ELISA Kit for Human Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase

96T78-5000 pg/mL人葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Glucokinase

96T0.78-50 ng/mL人谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Glutathione S-transferase A4

96T0.156-10 ng/mL人颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Granzyme A

96T15.6-1000 pg/mL人颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Granzyme B

96T0.156-10 ng/mL人生长分化因子5(GDF5)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Growth/differentiation factor 5

96T0.312-20 ng/mL人谷氧还蛋白3(GLRX3)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Glutaredoxin-3

96T0.156-10 ng/mL人γ-氨基丁酸A受体α2(γABRα2)ELISA试剂盒人

ELISA Kit for Human Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-2
Rosetta(DE3) 感受态细胞100ul*10说明书    6000  人心脏微血管内皮细胞 (HCMEC)( 5×105 )

    6100  人主动脉内皮细胞 (HAEC)( 5×105 )

    6110  人主动脉平滑肌细胞 (HASMC)( 5×105 )

    6200  人心肌细胞 (HCM) (1×106 )

    6210  成人心肌细胞 (HCMa) (1×106 )

    6300  人心脏成纤维细胞( HCF) ( 5×105 )

    6310  成人心室成纤维细胞 (HCFav)( 5×105 )

    6320  成人心房成纤维细胞 (HCFaa)( 5×105 )

15. 视觉细胞系统

    6510  人角膜上皮细胞 (HcorF)( 5×105 )

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


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