产品详情
使用说明:
1. Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞100ul*10说明书取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3. 42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。
培养方法:
Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞100ul*10说明书收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况,如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
培养实验又要开始了,科研工作者又该忙碌了,大家可能都在寻找适合自己的细胞,不用急,我们帮您掌舵,让您满意!
传代方法:细胞*汇合时,倒掉旧液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,显微镜下观察细胞*脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶,加培养基混匀分瓶,T25瓶中加培养基至6-8ml,T75瓶加培养基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培养。
ELISA Kit for Human Early placenta insulin-like peptide
96T62.5-4000 pg/mL人白介素15受体亚基alpha (IL15RA)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Interleukin-15 receptor subunit alpha
96T0.312-20 ng/mL人白介素20受体a (IL20Ra)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Interleukin-20 receptor subunit alpha
96T78-5000 pg/mL人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Cross-linked C-terminal telopeptide of Collagen alpha-1(I) chain
96T0.312-20 ng/mL人白介素13受体α-2(IL13RA2)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Interleukin-13 receptor subunit alpha-2
96T0.78-50 ng/mL人内凝集蛋白-1(ITLN-1)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Intelectin-1
96T1.56-100 ng/mL人胰岛素受体(ISR)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Insulin receptor
96T15.6-1000 pg/mL人抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Inhibin beta A chain
Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞100ul*10说明书人横纹肌肉瘤细胞;A-204
人肺腺癌细胞;Calu-3
人肾癌Wilms细胞;G401
人肝癌细胞;Hep G2 [HepG2]
人急性早幼粒白血病细胞;HL-60
人骨肉瘤细胞;HOS
人慢性髓系白血病细胞;K562
人前列腺癌细胞;LNCaP
人癌细胞;MCF 7B
人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4
中文名称:Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞100ul*10说明书
规格:100ul*10
用途:生化试剂。(用于科研试验研究)
储存条件: -70℃保存,必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月。
外观:(性状) 干冰运输,单加10kg干冰费
单位: 袋
操作方法:
一 、Tuner(DE3)pLysS 感受态细胞100ul*10说明书热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平 板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH 5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。