冰冻切片组织APC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

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冰冻切片组织APC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒（化学处理法）

实验开始前，将－20℃冰箱里的净化液（Reagent C）取出冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。

• 准备5至10瓶75cm²细胞培养瓶的细胞（5 X 10⁷），直至细胞生长铺满整个培养表面
• 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去
• 重复实验步骤2一次
• 加入3毫升用户自备的*乙二胺四乙酸混合液，铺满整个细胞生长表面
• 置入37℃培养箱3分种
• 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落
• 分别加入10毫升用户自备的*细胞培养液
• 移入一个50毫升锥形离心管
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A）
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升预冷的裂解工作液
• 涡旋震荡5秒，充分混匀
• 在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次
• 加入xx微升预冷的强化液（Reagent D）
• 涡旋震荡5秒，充分混匀
• 在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项9）
• 加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E），轻轻摇动试管混匀
• 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
• 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
• 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g
• 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物

冰冻切片组织APC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒注意：如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去

• （选择步骤）加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E）
• （选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g
• （选择步骤）小心抽去上清液
• 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀
• 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里

冰冻切片组织APC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒保存方式

保存净化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

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